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El MagAttract HMW DNA Kit garantiza el aislamiento reproducible de ADN genómico >150 kb. Se comparó el ADN aislado con el MagAttract HMW DNA Kit y con otros procedimientos basados en microesferas magnéticas mediante electroforesis en gel de campo pulsado. El MagAttract HMW DNA Kit demostró un rendimiento superior en el aislamiento de ADN de alto peso molecular (consulte la figura Aislamiento satisfactorio de ADN de alto peso molecular).
Elevados niveles de rendimiento y pureza uniformes
El MagAttract HMW DNA Kit usa un procedimiento sencillo y directo para ofrecer alto rendimiento de ADN puro de alto peso molecular. Las condiciones de lisis suave reducen al mínimo la fragmentación de ADN, al tiempo que se eliminan eficazmente los contaminantes y los inhibidores de la PCR, lo que resulta en ADN puro de alto peso molecular. La química y el procedimiento optimizados del MagAttract HMW DNA Kit mejoran notablemente el rendimiento y la pureza del ADN, en comparación con los métodos clásicos basados en columnas de centrifugación o microesferas magnéticas de otros proveedores (consulte las figuras Máximo rendimiento y pureza y Mejora en el rendimiento de varios tipos de muestra).
Eliminación eficaz de los inhibidores de la PCR
Las aplicaciones altamente sensibles como la real-time PCR o NGS requieren la eliminación de anticoagulantes, enzimas, cationes divalentes y otros inhibidores de este tipo. Se realizó la amplificación por real-time PCR de ADN aislado a partir de muestras de sangre estabilizadas con EDTA, heparina y citrato estabilizados con el MagAttract HMW DNA Kit. No se observa inhibición en ninguna de las muestras, lo que demuestra una correlación altamente lineal de los valores de CT con el volumen de entrada de las muestras (consulte la figura Sin inhibición en las muestras obtenidas de sangre anticoagulada).
ADN genómico listo para secuenciación de última generación
Dado que las tecnologías de secuenciación masiva en paralelo (MPS) utilizan longitudes de lectura cortas, la secuenciación se puede realizar con ADN genómico intacto >10 kb. Sin embargo, el ensamblaje de novo del genoma y el descubrimiento de variantes estructurales heredadas y adquiridas siguen siendo complejas con los productos de purificación de ADN estándar. Las bibliotecas de parejas con insertos más grandes tienen un impacto significativo en el éxito de la secuenciación, especialmente para genomas complejos ricos en repeticiones. El ADN genómico de alto peso molecular obtenido con el MagAttract HMW DNA Kit está listo para su uso en experimentos de NGS
Parámetro | Especificación |
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Lecturas (largas) mapeadas totales | 6521106 |
Tasa de errores | 0,36 % |
Tasa indel | 0,01 % |
Quimeras | 0,14 % |
Porcentaje de duplicación | 1,15 % |
El práctico protocolo MagAttract permite resultados reproducibles en tan solo 70 minutos.
Protocolo rápido y optimizado
Las enzimas y los tampones optimizados lisan suavemente las muestras, al tiempo que garantizan una fragmentación reducida del ADN genómico. El procedimiento incluye 4 pasos simples: lisado, unión, lavado y elución. Tras la lisis de la muestra, el ADN se une a la superficie de las microesferas magnéticas. Durante los pasos de lavado, los contaminantes y los inhibidores de la PCR se eliminan eficazmente y el ADN puro de alto peso molecular se eluye en el Buffer AE (consulte la figura Procedimiento del MagAttract HMW DNA Kit).
Distribución de tamaño ejemplar de ADN de células con el MagAttract HMW DNA Kit. Las muestras se analizaron con el Femto Pulse System y se normalizaron las señales en un pico máximo.
Features | Specifications |
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Sample amount | 200 μl de sangre; hasta 25 mg de tejido; 2 × 10e9 células bacterianas |
Process time | ~70 minutos para 12 muestras |
Elution volume | 100-200 µl |