miRCURY LNA RT Kit

• Optimisé pour les deux méthodes de détection des miRCURY LNA miRNA PCR Assays et Panels
• Synthèse rapide, facile et fiable du premier brin
• Comprend un ajout en ARN matriciel pour le suivi des performances

Le miRCURY LNA RT Kit permet une polyadénylation et une transcription inverse des miARN rapides et pratiques en une seule étape de réaction. L’utilisation d’une réaction RT universelle comme matrice pour les amplifications par PCR ultérieures simplifie grandement la procédure par rapport aux systèmes qui nécessitent une synthèse du premier brin spécifique au miARN. Cela s’avère plus pratique et vous permet de gagner du temps. Le kit a été conçu pour une utilisation avec les deux miRCURY LNA miRNA PCR Systems, en utilisant soit le SYBR Green, soit une sonde d’hydrolyse renforcée par LNA comme méthode de détection. Le kit contient deux tubes de tampon de réaction distincts pour la méthode de détection PCR correspondante.

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La transcription inverse simplifiée permet de gagner du temps et des ressources

L’utilisation d’une réaction universelle de transcription inverse par échantillon d’ARN permet d’économiser non seulement des réactifs et des échantillons précieux, mais aussi de gagner du temps. Le miRCURY LNA RT Kit est utilisé pour la synthèse d’ADNc de premier brin pour les deux smiRCURY LNA miRNA PCR Systems, à l’aide du SYBR Green pour la détection (voir miRCURY LNA miRNA PCR System en un coup d’œil) ou une sonde d’hydrolyse spécifique à l’ARNL (voir miRCURY LNA miRNA Probe PCR System en un coup d’œil). Le kit comprend un tampon de réaction spécifique à chaque système. Les dosages et les panels de miARN sont spécifiques à chaque système.

Une sensibilité inégalée

La transcription inverse universelle combinée à des composants de PCR renforcées par LNA et normalisées par T_m permet une quantification précise et fiable des miARN individuels à partir de 1 pg d’ARN total (voir la figure Quantification précise à partir de 1 pg de matériel départ d’ARN total). Grâce à une sensibilité exceptionnelle et un bruit de fond extrêmement faible, vous pouvez quantifier avec précision de très faibles niveaux de miARN sans préamplification. Les miRCURY LNA miRNA PCR System et miRCURY LNA miRNA Probe PCR System conviennent donc à tous les types d’échantillons, en particulier ceux à faible teneur en ARN, tels que le sérum, le plasma et d’autres biofluides.

Rapide et facile

Le miRCURY LNA RT Kit constitue la première étape des miRCURY LNA miRNA PCR Systems, qui utilisent soit le SYBR Green, soit une sonde d’hydrolyse pour la détection. Le protocole facile à suivre, d’une durée de 2 heures, permet d’enregistrer des gains de temps et de main-d’œuvre. L’utilisation d’une transcription inverse universelle et de protocoles RT-PCR optimisés simplifie grandement la procédure par rapport à d’autres solutions. En outre, l’ADNc généré lors de l’étape de RT peut être utilisé dans le système que vous avez choisi, ce qui vous permet de passer en douceur des panels aux dosages en fonction de vos besoins de recherche, et d’enregistrer des économies de temps et de matériel. Le nombre d’étapes de pipetage est réduit au minimum, ce qui minimise également les variations techniques. Cette procédure simplifiée, associée à une fabrication de dosages conforme aux normes ISO, permet d’obtenir une reproductibilité extrêmement élevée d’un jour à l’autre et d’un site à l’autre.

Un miRCURY LNA RT Kit pour deux systèmes de détection

Le miRCURY LNA RT Kit est utilisé pour les deux PCR miARN de miRCURY LNA Systems, soit par la méthode SYBR Green, soit par la méthode de détection par sonde d’hydrolyse. Ce kit comprend deux tampons de réaction spécifiques au système et tous les réactifs nécessaires pour réaliser une polyadénylation et une transcription inverse des miARN rapides et pratiques en une seule étape de réaction. L’utilisation d’une seule réaction de transcription inverse universelle comme matrice pour les amplifications par PCR ultérieures simplifie grandement la procédure par rapport aux systèmes qui nécessitent une synthèse de premier brin spécifique au miARN (voir la figure Modèle L’avantage d’une étape universelle de transcription inverse). En outre, l’ADNc généré lors de l’étape de RT peut être utilisé dans le système que vous avez choisi, ce qui vous permet de passer en douceur des panels aux dosages en fonction de vos besoins de recherche, et d’enregistrer des économies de temps et de matériel. L’ajout d’ARN UniSp6 inclus dans le kit peut être utilisé avec le dosage de contrôle – UniSp6 miRCURY LNA miRNA PCR Assay – comme contrôle positif de transcription inverse et/ou comme calibrateur inter-plaques dans nos panels de PCR miARN.

miRCURY LNA miRNA PCR System (SYBR Green)

L’architecture de ce système consiste en une détection par SYBR Green avec deux amorces renforcées par LNA et spécifiques aux miARN pour une performance inégalée (voir miRCURY LNA miRNA PCR System en un coup d’œil).

• miRCURY LNA RT Kit
• RNA Spike-In Kit
• miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit
• miRCURY LNA miRNA PCR Assays (prédéfini, Custom)
• miRCURY LNA miRNA PCR Panels (miRNome, Focus, Custom)

miRCURY LNA miRNA Probe PCR System

Une sonde d’hydrolyse unique, spécifique des miARN et renforcée par LNA, est associée à une amorce directe spécifique des miARN et renforcée par LNA pour obtenir de vrais signaux hautement spécifiques et sensibles (voir miRCURY LNA miRNA Probe PCR System en un coup d’œil).

• miRCURY LNA RT Kit
• RNA Spike-In Kit
• miRCURY LNA Probe PCR Kit
• miRCURY LNA miRNA Probe Assays (prédéfini, Custom)
• miRCURY LNA miRNA Probe Panels (miRNome, Focus, Custom)

Les réactions de transcription inverse sont faciles à réaliser en un seul tube. L’ARN total, y compris le miARN, est utilisé comme matériel de départ et la procédure implique l’incubation de la réaction entre 40 et 42 °C pendant 1 heure, suivie d’une étape d’inactivation par une brève incubation à 95 °C.

Le miRCURY LNA RT Kit est utilisé comme un élément des miRCURY LNA miRNA PCR and Probe PCR Systems pour :

• La détection, le profilage et la quantification de l’expression des miARN
• Le développement de biomarqueurs de miARN – dépistage et identification
• La régulation des miARN et l’analyse des voies
• La détection de miARN dans des types d’échantillons complexes et dans des échantillons présentant de faibles niveaux d’expression de miARN
• La détection des snoRNA
• La validation du séquençage des miARN