therascreen MGMT Pyro Kit

Le kit therascreen MGMT Pyro est utilisé pour la mesure quantitative de la méthylation de quatre sites CpG de l’exon 1 du gène MGMT humain. Le kit contient les amorces et les réactifs pour l’amplification des gènes, plus les tampons, amorces et réactifs pour la détection quantitative de la méthylation en temps réel à l’aide de la technologie Pyrosequencing (Pyroséquençage) sur le système PyroMark Q24. (1)

Le kit therascreen MGMT Pyro est utilisé pour la mesure quantitative de la méthylation dans quatre sites CpG de l’exon 1 du gène MGMT humain (séquence génomique sur le chromosome 10 de 131 265 519 à 131 265 537 : CG ACG CCCG CAGGTCCTCG ). Le gène MGMT (O(6)-méthylguanine-ADN-méthyltransférase) encode une enzyme qui facilite la réparation de l’ADN alkylé en supprimant les groupes alkyles de la position O6 de la guanine. La méthylation du gène MGMT est associée à une diminution de l’expression génétique et de l’activité de réparation de l’ADN. La méthylation du MGMT est comprise entre 25 et 50 % pour de nombreux cancers comme le cancer du cerveau, du colon, du poumon et du sein. (1)

L’ADN génomique converti par traitement au bisulfite est amplifié par PCR et séquencé dans la région définie (voir figure « Illustration du test therascreen MGMT »). Les séquences entourant les positions définies servent de valeurs de normalisation et pics de référence pour l’évaluation quantitative et qualitative de l’analyse. Après la PCR à l’aide des amorces ciblant la région définie de l’exon 1, les amplicons sont immobilisés sur des billes de sépharose recouvertes de streptavidine (Streptavidin Sepharose High Performance). L’ADN simple brin est préparé et les amorces de séquence s’hybrident avec l’ADN. Les échantillons sont ensuite analysés sur le système PyroMark Q24. (1)

Le kit therascreen MGMT Pyro permet une mesure quantitative de la méthylation dans quatre sites CpG de l’exon 1 du gène MGMT humain (voir figures « Tracé de pyrogramme obtenu après analyse d’ADN non méthylé converti au bisulfite, provenant d’un échantillon de glioblastome humain », « Tracé de pyrogramme obtenu après analyse d’ADN méthylé converti au bisulfite, provenant d’un échantillon de glioblastome humain » et « Tracé de pyrogramme obtenu après analyse d’ADN de contrôle fortement méthylé converti au bisulfite ») et peut être utilisé dans plusieurs domaines d’applications cliniques, comme l’évaluation diagnostique, la recherche clinique et les tests pharmaceutiques ou biopharmaceutiques. (1)