miScript Primer Assays

miScript PCR Systemを用いたmature miRNAの定量

Features

  • 高感度で特異的なmiRNA検出および定量
  • miRBase に登録されていないmature miRNAでもカスタムデザインで対応
  • GeneGlobe ウェブサイトで簡便にオンライン注文

Product Details

miScript Primer Assayは最新の miRBaseに登録されているヒト、マウス、ラット、イヌのmiRNA全てに対応したmiRNAに特異的なプライマーです。miScript PCR Systemを構成する製品であるmiScript Primer AssayはmiRNAの検出と定量に使用します。miScript HiSpec Buffer(mature miRNA のみを検出)あるいはmiScript HiFlex Buffer (適切なアッセイを用いて全RNA種の同時定量)のどちらかとmiScript II RT Kit を用いてcDNAを調製します。どちらのcDNAも、miScript Primer AssayとmiScript SYBR Green PCR Kitを用いたリアルタイムPCRでテンプレートとして 使用します。

Performance

miScript PCR SystemのmiScript Primer Assayを用いたmature miRNA検出で、再現性と信頼性の高い結果が得られます。ほとんどのmiRNAが低レベルで発現しているので、信頼性の高いデータを確保するためには感度が非常に重要です。miScript PCR Systemはわずか10コピーのmiRNAを高い感度で検出できます(図"わずか10 コピー数のmiRNA を高精度に検出"を参照)。わずか10 pgのトータルRNAから正確で再現性のあるmiRNAデータが得られます(図"広いダイナミックレンジと高い増幅効率")。増幅効率は一貫して高く、ΔΔCT法を用いて、複数のmiRNAの正確な発現解析を可能にします。

Principle

miScript PCR Systemは SYBR® Green をベースにしたリアルタイム PCR を用いて、miRNAの定量とプロファイリングを高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、RNAをcDNAに変換するステップと 、続くリアルタイムPCRによりmiRNAを検出するステップをすべてカバーします。

miScript PCR Systemを用いたmature miRNAの検出と定量には次のような製品が必要です:

  • miScript II RT Kit — シングルステップで簡単にcDNA合成を実現し、一回のcDNA合成で網羅的なmiRNA検出に使用可能です。2種類のバッファーシステム(デュアルバッファーシステム)により、リアルタイムPCRを用いたmiRNA定量における特殊なニーズを満たすことができます。
  • miScript PreAMP PCR KitおよびPrimer Mixes — 本キットとプライマーミックスは限られた量のmiRNAからバイアスのないプレアンプリフィケーションを行ない、続くmiRNAプロファイリングを実現します。
  • miScript SYBR® Green PCR Kit — 本キットには、QuantiTect SYBR® Green PCR Master MixとmiScript Universal Primer (reverse プライマー)が入っています。 reverse プライマーはmiScript Primer Assay あるいはmiScript miRNA PCR Arrayとの組み合わせで miRNAを検出できます。
  • miScript Primer Assay-miScript Primer AssayはmiRBase の最新情報を基にmature miRNAを検出するようにデザインされたmiRNAに特異的なforwardプライマーです。

  • Procedure

    mature miRNAの検出では、miScript II RT Kitに付属のmiScript HiSpec BufferあるいはmiScript HiFlex Bufferを用いた逆転写反応で調製したcDNAを、リアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。miRNAに特異的なmiScript Primer Assays(forwardプライマー)と、miScript Universal Primer(reverseプライマー )およびQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixの入ったmiScript SYBR Green PCR Kit を用いて、リアルタイム定量PCR を実施します。

    他のnoncoding RNAの検出では、miScript II RT Kitに付属のmiScript HiFlex Bufferを用いた逆転写反応で調製したcDNAを、リアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。miScript Primer Assays(forwardプライマー)と、miScript Universal Primer(reverseプライマー )およびQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixの入ったmiScript SYBR Green PCR Kit を用いて、リアルタイム定量PCR を実現します。研究対象のsmall RNAのmiScript Primer Assayが入手不可能な場合は、カスタムデザインが可能です。

    Applications

    miScript PCR Systemを構成するmiScript Primer Assayは以下のようなアプリケーションに最適です:

    • Mature miRNA定量
    • snoRNA検出

    Supporting data and figures

    Resources

    Safety Data Sheets (1)

    FAQ

    3322 - What is the concentration of the reconstituted miScript Primer Assay (100) and miScript Precursor Assay (100) tubes?

    After reconstitution of the lyophilized primers in 550ul nuclease-free water or TE, the miScript Primer Assay and miScript Precursor Assay 100 reaction tubes will be at 10X stock concentration.  They should be used at 1X concentration (0.5 uM) in the PCR/RT-PCR reaction (eg. for a 25ul reaction, 1/10th of the total volume, or 2.5ul, should be primer). For Fluidigm® BioMarkTM System related applications, please refer to the miScript Microfluidics Handbook for primer concentrations and reconstitution recommendations.

    Are miScript Primer Assay included in miScript miRNA PCR Arrays the same primers as the miScript Primer Assays available in individual tubes?

    Yes, miScript Primer Assays included in miScript miRNA PCR Arrays are the same primers as the miScript Primer Assays available in individual tubes.

    FAQ ID - 3441

     

    Is the expression level of miRNA precursors lower compared to that of mature miRNAs?
    In general, precursor miRNA (pre-miRNA) levels are lower than those of mature miRNAs. However this is not always the case. Sometimes the levels of both mature and pre-miRNA may be similar, or pre-miRNA levels may be higher. For this reason, researchers often want to quantify pre-miRNA as well as mature miRNA.  QIAGEN offers miScript precursor miRNA assays as well as mature assays for many miRNAs. 
    FAQ ID -2807
    Are miScript Primer Assays available for plant mature miRNAs?
    Yes, miScript Primer Assays are available for plant miRNAs at www.qiagen.com/GeneGlobe.
    FAQ ID - 3439
    How reliable are the results from the miScript Primer Assays?
    Assuming the use of good, consistent experimental technique, real-time PCR methods such as the miScript Primer Assays provide very reproducible results. To insure the reliability of your results and to reliably detect smaller fold changes in miRNA expression from the PCR Assays, the performance of replicate determinations (such as biological triplicates) is highly recommended.
    FAQ ID -2730
    Are plant miScript Primer Assay designs wet-bench validated?

    Any plant miScript Primer Assay included on a plant miScript miRNA PCR Array has been bench validated.

    FAQ ID - 3440
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