miScript SYBR® Green PCR Kit

miScript PCR Systemを用いたリアルタイムPCRによるmiRNA検出

Features

  • 高感度で特異的なmiRNA検出および定量
  • 1回のcDNA調製から網羅的なmiRNAの定量が可能
  • 同一cDNA からmiRNA とmRNA を定量
  • ROX色素を含有し、オプションで蛍光補正ができる

Product Details

miScript SYBR Green PCR Kitは、miScript PCR Systemで行なうmiRNAの検出と定量に必須です。本キットはQuantiTect SYBR Green Kitで実証済みのテクノロジーを基盤にしています。miScript II RT Kitを用いて調製したcDNAは、miScript SYBR Green PCR Kitと、PCR アレイ(miRNomeあるいはPathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays) あるいは適切なアッセイ(miRNAあるいはその他のnoncoding RNAのmiScript Primer Assays、precursor miRNAのmiScript Precursor Assays、またはmRNA用のQuantiTect Primer Assay)を用いるリアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。

Performance

miScript SYBR Green PCR Kitは、miScript PCR Systemを構成する製品と組み合わせて、miRNAの検出および定量を高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、高感度、広いダイナミックレンジを提供します。増幅効率は一貫して高く、ΔΔCT法を用いた数種類のmiRNAの正確な発現解析を可能にします(図" 大腸がんにおけるmiRNA発現")。miScript PCR Systemの高いパフォーマンスにより、技術的および生物学的な繰り返し実験間で、再現性のある結果が最初の試みで得られます。

See figures

Principle

miScript PCR Systemは SYBR Green をベースにしたリアルタイム PCR を用いて、miRNAの定量とプロファイリングを高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、RNAをcDNAに変換するステップと 、続くリアルタイムPCRによりmiRNAを検出するステップをすべてカバーしています。

miScript PCR Systemの製品構成:

miScript II RT Kit — シングルステップで簡単にcDNA合成を実現。一回のcDNA合成で網羅的なmiRNA検出に使用可能です。2種類のバッファーシステム(デュアルバッファーシステム)により、リアルタイムPCRを用いたmiRNA定量における特殊なニーズを満たすことができます。
miScript PreAMP PCR Kit およびPrimer Mixes — 本キットとプライマーミックスは限られた量のmiRNAからバイアスのないプレアンプリフィケーションを行ない、続くmiRNAプロファイリングを実現します。
miScript SYBR Green PCR Kit — 本キットには、QuantiTect SYBR Green PCR Master MixとmiScript Universal Primer (reverse プライマー)が入っています。 reverse プライマーとmiScript Primer Assay あるいはmiScript miRNA PCR Arrayの組み合わせで miRNAを検出できます。
miScript Primer AssayあるいはmiScript Precursor Assay-miScript Primer Assayは、mature miRNAを検出するようにデザインされているmiRNA特異的なforwardプライマーです。 miScript Precursor Assaysは、precursor miRNAのステムループ配列をターゲットにしているforwardおよびreverseプライマーです。アッセイは、miRBaseから最新の配列情報を用いて設計されています。
miScript miRNA PCR Array-miRNome miScript miRNA PCR ArrayあるいはPathway-Focused miScript miRNA PCR Arrayは、mature miRNAを迅速にプロファイリングするためのフォーマット済みのシングルユースのPCRアレイです。
miScript miRNA PCR Array Data Analysis Tool-この無料のウェブベースのツールによりmiScript miRNA PCR Arrayの相対定量のΔΔCT法を簡単に行なえます。
リアルタイムPCR によるmiRNA検出

miScript SYBR Green PCR Kitは、逆転写反応中にcDNA 5'末端のUniversal Tag配列に結合するmiScript Universal PrimerとQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixを含有しています。一回の cDNA 合成で網羅的なmiRNAのテストが可能です。miScript HiSpec Buffer を用いて調製したcDNAは、miScript miRNA PCR ArrayあるいはmiScript Primer Assayによるmature miRNA定量に使用できます。miScript HiFlex Bufferを用いて調製したcDNAは、リアルタイムPCRで適切なプライマーを使用して様々なRNA種の検出に使用可能です:miRNAあるいはその他のnoncoding RNA用のmiScript Primer Assays、precursor miRNA用のmiScript Precursor Assays、またはmRNA用のQuantiTect Primer Assay。 
 

Procedure

逆転写反応はmiScript II RT Kitを使用して行なわれます。得られたcDNAは、miScript SYBR Green PCR Kitと適切なアッセイあるいはアレイとで行なうリアルタイムPCRのテンプレートとして使用されます。これによりmiRNAの定量とプロファイリングの手順は簡単になり、リアルタイムPCRサーマルサイクラーを所有するラボであれば本キットのご利用が可能です。

Applications

miScript PCR Systemを構成するmiScript SYBR Green PCR Kitは以下のようなアプリケーションに最適です:

mature miRNAの定量およびプロファイリング
miRNAおよびmRNAの同時検出
mature miRNAおよびprecursor miRNAの同時検出
snoRNAおよび他のnoncoding RNAの検出

Supporting data and figures

Resources

Safety Data Sheets (1)

FAQ

What is the sequence of the miScript Universal Primer?
The sequence of the miScript Universal Primer in the miScript SYBR Green kit is proprietary.
FAQ ID -2994
Is the expression level of miRNA precursors lower compared to that of mature miRNAs?
In general, precursor miRNA (pre-miRNA) levels are lower than those of mature miRNAs. However this is not always the case. Sometimes the levels of both mature and pre-miRNA may be similar, or pre-miRNA levels may be higher. For this reason, researchers often want to quantify pre-miRNA as well as mature miRNA.  QIAGEN offers miScript precursor miRNA assays as well as mature assays for many miRNAs. 
FAQ ID -2807
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