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TopTaq Master Mix Kit

確実なエンドポイントPCR 用に使い易い冷蔵保存酵素マスターミックス

Features

  • ピペッティング操作が極めて少なく、即使用可能なマスターミックス
  • 冷蔵保存なので凍結、融解の繰り返し不要
  • 高収量のPCR反応
  • 室温で取り扱える簡便性
  • 至適化済みの同一プロトコールで全てのPCRアッセイに対応

Product Details

TopTaq DNA Polymeraseの特長と即使用可能なマスターミックスの長所を組み合わせることによりTopTaq Master Mix Kitは最高の使い易さを実現します。TopTaq Master Mix Kitには、TopTaq DNA Polymerase、至適化が最小限で済む画期的なTopTaq PCR Buffer、およびdNTP が含まれています。酵素保存バッファーに含まれるユニークなTopTaq Stabilizer により、TopTaq Master Mix は4℃で保存可能で、反応セットアップは室温で行なえ解凍の手間が不要です。マスターミックスには全ての成分が含まれているので、ピペッティングステップが減少し、コンタミのリスクが抑えられます。TopTaq Master Mixを25℃あるいは4℃で長期保存後も、高収量のPCR 産物が得られました。

Performance

TopTaq Master Mix Kitは至適化不要で、スタンダードから特殊用途までのエンドポイントPCRに使用できます。TopTaq Master Mixは25℃、4℃で4ヶ月間保存した後でも、高収量のPCR産物が得られ、TopTaq Master Mixが非常に安定で適応力があり、信頼できる増幅システムであることを証明しています(図“ 高収量のPCR反応”)。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの不活性化を防ぎます。バランスのとれたカリウムとアンモニウムイオンを含有するユニークなPCRバッファーがマスターミックスに含まれ、プライマー/テンプレートの特異的なアニーリングを促進すると同時に非特異的なアニーリングを抑制します。TopTaq DNAポリメラーゼは他社のDNAポリメラーゼに比べて高性能で、少量のテンプレート量を使用した場合でも、フラグメントサイズに関わらず、特異的産物が高収量で得られます(図“ 至適化なしに高収量のPCR産物)。
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Principle

TopTaq Master Mix Kitは、比類のない使いやすさで信頼性の高いエンドポイントPCRを実現するためにQIAGENにより開発されました。TopTaq PCR systemが開発されるまで全てのPCR 酵素は-20℃で保存しなければなりませんでした。しかし、酵素溶液中に含まれているTopTaq Stabilizer のユニークな特性により、TopTaq DNA Polymerase は4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。このようにすぐに使用可能なマスターミックスは簡便性を増大します。異なるサイズのフラグメントを増幅する場合でも、TopTaq DNA Polymeraseにより高収量の特異性の高い産物が得られます(図“ 至適化なしに高収量のPCR産物”)。

TopTaq PCR Buffer

画期的なTopTaq PCR Bufferにより特異的PCR産物の増幅が促進されます。本バッファーは、各PCRサイクルのアニーリングステップ中に、プライマー特異的な結合の割合を非特異的な結合に対して高めます。このPCR バッファーはユニークな配合比のKClと (NH4)2SO4を含み、従来のPCRバッファーに比べ、幅広い温度やMg2+濃度の範囲で厳密で特異的なプライマー・アニーリングを実現します(図“ プライマーのアニーリングにおける特異性が増加”)。異なるアニーリング温度あるいはMg2+ 濃度を用いて行なうPCRの至適化は最小限ですみ、または不要なこともあります。

TopTaq Stabilizer

TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、長期冷蔵保存中のポリメラーゼの不活性化を防ぎます(“ 4℃で安定化”)。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防御します。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下させることなくポリメラーゼから遊離します。  

CoralLoad Concentrate

TopTaq Master Mix Kit にはCoralLoad Concentrate が添付されて更に使い易くなっています。CoralLoad Concentrate は2種類のマーカー色素とゲルローディング試薬が入っています。この画期的な試薬はピペッティングの目視化を改良し、DNAの移動距離の予測およびアガロースゲルの泳動時間の至適化が容易に行なえます。CoralLoad Concentrateを用いた際は、PCR反応液を直接アガロースゲルにロードできます。 ローディングバッファーの添加の必要がありません(図“ 簡便なCoralLoad Concentrate”)。

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Procedure

TopTaq Master Mix KitはTopTaq DNA Polymeraseのすべての特長と即使用可能なマスターミックスの長所を提供します。TopTaq Master Mix Kitを使用すると、各反応成分を個々にピペッティングする必要がなく、コンタミのリスクやピペッティングによる反応条件の変動は最小限に抑えられ、PCRセットアップは迅速かつ容易に行なえます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。また、氷なしに反応セットアップを即可能な便利性が加わり、通常必要な試薬を解凍する時間を節約できます (フローチャート“ TopTaq 操作手順”)。 
至適化不要で高収量のPCR産物

ほとんどのPCRアッセイ用に使用可能な至適化済みのプロトコールにより、プライマーとテンプレートシステム毎での実験条件の検討は不要なため、時間および経費を節約できます。TopTaq Master Mix を25℃、4℃で4ヶ月間保存し、使用しても高収量の特異的なPCR産物が得られます(図“ 信頼性の高い高収量のPCR産物”)。

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Applications

TopTaq Master Mix Kit は全てのエンドポイント PCR アプリケーションに最適です。

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
Applications
Real-time or endpoint
dNTP's included
Mastermix
Enzyme activity
Reaction type
Sample/target type
Single or multiplex
Storage conditions
With/without hotstart

Resources

FAQ

Which nucleotide analogs can be used with TopTaq DNA Polymerase?

Nucleotide analogs that can be used with TopTaq DNA Polymerase are:

  • dNTP
  • ddNTP
  • biotin-dATP
  • dITP
FAQ ID -1741
Is TopTaq DNA Polymerase a hot-start polymerase?

No. TopTaq DNA Polymerase is not a hot-start polymerase. Although TopTaq Stabilizer reduces enzyme accessibility at lower temperatures, it does not allow stringent hot-start procedures.

 

FAQ ID -1748
Does TopTaq Stabilizer of the TopTaq DNA Polymerase and Master Mix Kits interfere with downstream applications?

No. TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer of the TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits does not interfere with downstream applications such as cloning, sequencing, or restriction digestion.

 

 

FAQ ID -1744
Do CoralLoad dyes supplied in various QIAGEN PCR Kits interfere with downstream applications?

CoralLoad dyes supplied in PCR Kits such as, e.g., Taq, HotStarTaq, and TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix do not interfere with most downstream enzymatic applications.

However, for reproducible results, purification of PCR products using the QIAquick or MinElute PCR Purification Kits prior to enzymatic manipulation is recommended.

 

 

FAQ ID -1745
Can TopTaq Master Mix simply be stored at room temperature on the lab bench for up to 4 months?

Our data show stability of the TopTaq Master Mix Kit at a constant temperature of 25°C for up to 4 months. However, we do not recommend storage of TopTaq Master Mix on the bench due to temperature fluctuations typical in standard laboratories; nor can we guarantee the performance of TopTaq Master Mix under this storage condition.

FAQ ID -2052
How comparable is CoralLoad gel loading dye contained in various QIAGEN PCR Kits to Sigma Red?

CoralLoad gel tracking dye contained in Taq, HotStarTaq, TopTaq DNA Polymerase and TopTaq Master Mix Kits separates into 2 fragment-size dependent colors (orange and red) when loaded onto an agarose gel. Sigma Red buffer only has one color which is harder to visualize.

 

 

FAQ ID -1644
What is the shelf-life of TopTaq DNA Polymerase and Master Mix?

TopTaq DNA Polymerase and the TopTaq Master Mix Kit are shipped on dry ice but retain full activity at room temperature (15-25°C) for at least 2 weeks. Both kits can be stored at 2-8°C for up to 12 months.

 

 

 

FAQ ID -1743
What is the upper length of PCR products that can be amplified with TopTaq DNA Polymerase and Master Mix Kits?

The maximum amplicon length we have tested using TopTaq DNA Polymerase and the TopTaq Master Mix Kit was 5 kb, amplified from genomic DNA template. Larger PCR amplicon sizes are possible when using less complex template DNA.

 

 

 

 

FAQ ID -1738
What is the fidelity of TopTaq DNA Polymerase?

The error rate of TopTaq DNA Polymerase is very similar to that of standard Taq DNA Polymerase: approximately 2-3x 10e-5 (per base, per cycle).

 

 

 

 

FAQ ID -1739
Can TA/UA cloning be done with PCR products amplified with TopTaq DNA Polmyerase and TopTaq Master Mix Kits?

Yes. The terminal transferase activity of TopTaq DNA Polymerase adds a 3`A-overhang to the PCR product and therefore enables TA- and UA- cloning.

 

 

 

FAQ ID -1740
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