miScript SYBR® Green PCR Kit
miScript PCR Systemを用いたリアルタイムPCRによるmiRNA検出
miScript PCR Systemを用いたリアルタイムPCRによるmiRNA検出
miScript SYBR Green PCR Kitは、miScript PCR Systemで行なうmiRNAの検出と定量に必須です。本キットはQuantiTect SYBR Green Kitで実証済みのテクノロジーを基盤にしています。miScript II RT Kitを用いて調製したcDNAは、miScript SYBR Green PCR Kitと、PCR アレイ(miRNomeあるいはPathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays) あるいは適切なアッセイ(miRNAあるいはその他のnoncoding RNAのmiScript Primer Assays、precursor miRNAのmiScript Precursor Assays、またはmRNA用のQuantiTect Primer Assay)を用いるリアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。
miScript SYBR Green PCR Kitは、miScript PCR Systemを構成する製品と組み合わせて、miRNAの検出および定量を高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、高感度、広いダイナミックレンジを提供します。増幅効率は一貫して高く、ΔΔCT法を用いた数種類のmiRNAの正確な発現解析を可能にします(図" 大腸がんにおけるmiRNA発現")。miScript PCR Systemの高いパフォーマンスにより、技術的および生物学的な繰り返し実験間で、再現性のある結果が最初の試みで得られます。
miScript PCR Systemは SYBR Green をベースにしたリアルタイム PCR を用いて、miRNAの定量とプロファイリングを高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、RNAをcDNAに変換するステップと 、続くリアルタイムPCRによりmiRNAを検出するステップをすべてカバーしています。
miScript PCR Systemの製品構成:
miScript SYBR Green PCR Kitは、逆転写反応中にcDNA 5'末端のUniversal Tag配列に結合するmiScript Universal PrimerとQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixを含有しています。一回の cDNA 合成で網羅的なmiRNAのテストが可能です。miScript HiSpec Buffer を用いて調製したcDNAは、miScript miRNA PCR ArrayあるいはmiScript Primer Assayによるmature miRNA定量に使用できます。miScript HiFlex Bufferを用いて調製したcDNAは、リアルタイムPCRで適切なプライマーを使用して様々なRNA種の検出に使用可能です:miRNAあるいはその他のnoncoding RNA用のmiScript Primer Assays、precursor miRNA用のmiScript Precursor Assays、またはmRNA用のQuantiTect Primer Assay。
逆転写反応はmiScript II RT Kitを使用して行なわれます。得られたcDNAは、miScript SYBR Green PCR Kitと適切なアッセイあるいはアレイとで行なうリアルタイムPCRのテンプレートとして使用されます。これによりmiRNAの定量とプロファイリングの手順は簡単になり、リアルタイムPCRサーマルサイクラーを所有するラボであれば本キットのご利用が可能です。
miScript PCR Systemを構成するmiScript SYBR Green PCR Kitは以下のようなアプリケーションに最適です:
cDNA was prepared from human colon adenocarcinoma total RNA and normal adjacent colon total RNA. miRNome profiling was performed using the Human miRNome miScript miRNA PCR Array. Fifty-six miRNAs were strongly downregulated and 50 were strongly upregulated in the adenocarcinoma tissue (red lines indicate ±4-fold change).