QIAseq FX Single Cell DNA Library Kit

QIAseq FX Single Cell DNA Library kit は、動物、微生物などのシングルセルや微量のゲノミックDNA から全ゲノムシークエンスを行なうためのソリューションを提供します。このキットには細胞溶解、全ゲノム増幅、酵素によるDNAの断片化、そしてPCR フリーのNGS ライブラリー調製に必要なすべての試薬が含まれています。またこのキットはゲノムカバレッジを最大化して、シークエンスの信頼度を高めるようにデザインされています。そのため染色体の異数体解析、コピー数多型（CNV）や微量サンプルからの全ゲノムシークエンスに最適です。

本キットは、GC 含量率の高い領域を含むシングルセルから優れたゲノムカバレッジを提供します。 PCR ベースの全ゲノム増幅法に比べて、QIAseq FX Single Cell DNA Library Kit で採用しているmultiple displacement annealing 技術（MDA）は、PCR を使用せず高GC 領域での増幅バイアスも最小化します。さらにシングルセルからであっても、ライブラリーの多様性を高め、ゲノムカバレージを最大化します。高いフィデリティーを誇るMDA 法はわずかなシークエンスエラーや偽陽性を最小化することができるため、より高感度に変異を検出します。 低いバックグラウンドや高いゲノムカバレッジは染色体の異性体解析、コピー数多型（CNV）そしてシングルセルからの変異解析に最適です。

本キットには、シングルセルからの多様な全ゲノムライブラリー調製のための3 つの重要な技術があります。細胞溶解後、phi29 ポリメラーゼを使用したフィデリティの高いMDA 反応により、gDNA をµg 単位まで増幅することができます。この増幅されたgDNA は、酵素的にランダムに断片化されます。この断片化には、増幅したすべてのgDNA は必要とせず、残りのgDNA は後の再検証等に利用することができます。断片化したgDNA は、シングルチューブライブラリ調製試薬を使用して、簡単操作でNGS ライブラリーを調製することができます。シングルセル採取から始まるすべてのプロセスは、PCR を使用せずに　およそ3.5 時間で完了します。

本キットは、細胞からNGS ライブラリー調製までをまかなえるキットで、真核細胞、バクテリアまたは非常に希少なgDNA から多様な全ゲノムライブラリーを作成するのに必要な試薬が含まれています。単離したシングルセルやレーザーマイクロダイセクションなどで採取される小細胞クラスターを効率的に溶解する試薬が含まれています。細胞溶解後、gDNA はMDA 技術（multiple displacement annealing technology）で実験に十分な量まで増幅されます。増幅したgDNA はランダムかつ効率的に酵素消化が行われ、短い断片にします。これら断片の末端は適切に処理され、アダプターのライゲーションが行われます。そしてこれらの断片化DNA は、シークエンス解析において標準的な方法で処理されるように、効率的にライブラリーに組み込まれます。さらに、ライブラリー調製を通じてPCR を使用しないため、インタクトに近い形でのライブラリー作成を可能としました。