miScript Primer Assays
miScript PCR Systemを用いたmature miRNAの定量
Features
- 高感度で特異的なmiRNA検出および定量
- miRBase に登録されていないmature miRNAでもカスタムデザインで対応
- GeneGlobe ウェブサイトで簡便にオンライン注文
Product Details
miScript Primer Assayは最新の miRBaseに登録されているヒト、マウス、ラット、イヌのmiRNA全てに対応したmiRNAに特異的なプライマーです。miScript PCR Systemを構成する製品であるmiScript Primer AssayはmiRNAの検出と定量に使用します。miScript HiSpec Buffer（mature miRNA のみを検出）あるいはmiScript HiFlex Buffer （適切なアッセイを用いて全RNA種の同時定量）のどちらかとmiScript II RT Kit を用いてcDNAを調製します。どちらのcDNAも、miScript Primer AssayとmiScript SYBR Green PCR Kitを用いたリアルタイムPCRでテンプレートとして 使用します。
Performance
miScript PCR SystemのmiScript Primer Assayを用いたmature miRNA検出で、再現性と信頼性の高い結果が得られます。ほとんどのmiRNAが低レベルで発現しているので、信頼性の高いデータを確保するためには感度が非常に重要です。miScript PCR Systemはわずか10コピーのmiRNAを高い感度で検出できます（図"わずか10 コピー数のmiRNA を高精度に検出"を参照）。わずか10 pgのトータルRNAから正確で再現性のあるmiRNAデータが得られます（図"広いダイナミックレンジと高い増幅効率"）。増幅効率は一貫して高く、ΔΔCT法を用いて、複数のmiRNAの正確な発現解析を可能にします。
Principle
miScript PCR Systemは SYBR® Green をベースにしたリアルタイム PCR を用いて、miRNAの定量とプロファイリングを高い感度と特異性で実現します。miScript PCR Systemは、RNAをcDNAに変換するステップと 、続くリアルタイムPCRによりmiRNAを検出するステップをすべてカバーします。
miScript PCR Systemを用いたmature miRNAの検出と定量には次のような製品が必要です：
miScript Primer Assay－miScript Primer AssayはmiRBase の最新情報を基にmature miRNAを検出するようにデザインされたmiRNAに特異的なforwardプライマーです。
Procedure
mature miRNAの検出では、miScript II RT Kitに付属のmiScript HiSpec BufferあるいはmiScript HiFlex Bufferを用いた逆転写反応で調製したcDNAを、リアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。miRNAに特異的なmiScript Primer Assays（forwardプライマー）と、miScript Universal Primer（reverseプライマー ）およびQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixの入ったmiScript SYBR Green PCR Kit を用いて、リアルタイム定量PCR を実施します。
他のnoncoding RNAの検出では、miScript II RT Kitに付属のmiScript HiFlex Bufferを用いた逆転写反応で調製したcDNAを、リアルタイムPCRのテンプレートとして使用します。miScript Primer Assays（forwardプライマー）と、miScript Universal Primer（reverseプライマー ）およびQuantiTect SYBR Green PCR Master Mixの入ったmiScript SYBR Green PCR Kit を用いて、リアルタイム定量PCR を実現します。研究対象のsmall RNAのmiScript Primer Assayが入手不可能な場合は、カスタムデザインが可能です。
Applications
miScript PCR Systemを構成するmiScript Primer Assayは以下のようなアプリケーションに最適です：
- Mature miRNA定量
- snoRNA検出
Supporting data and figures
Accurate detection of as low as 10 miRNA copies.
Synthetic miR-21 was used to generate cDNA using the miScript II RT Kit with [A] miScript HiSpec Buffer or [B] miScript HiFlex Buffer (both provided in the kit). A range of amounts from 10 copies to 106 copies of this cDNA was used in real-time PCR using the miScript PCR System. Real-time PCR was performed on the Rotor-Gene Q cycler. The resultant CT values decreased linearly with increasing miRNA copy number, indicating sensitive detection from a wide range of template amounts.
Resources
Safety Data Sheets (1)
FAQ
3322 - What is the concentration of the reconstituted miScript Primer Assay (100) and miScript Precursor Assay (100) tubes?
Are miScript Primer Assay included in miScript miRNA PCR Arrays the same primers as the miScript Primer Assays available in individual tubes?
Is the expression level of miRNA precursors lower compared to that of mature miRNAs?
Are miScript Primer Assays available for plant mature miRNAs?
How reliable are the results from the miScript Primer Assays?
Are plant miScript Primer Assay designs wet-bench validated?