miRCURY LNA miRNA Custom PCR Assays

• 任意のmiRNA用に独自のLNA化したmiRNA PCRプライマーセットを設計
• miRNAの敏感で特異的な検出と定量
• 迅速かつシンプルな2ステッププロトコールで3時間以内検出の実現

miRCURY LNA miRNAカスタムPCRアッセイは、miRCURY LNA miRNA PCR システムを使った高感度かつ特異的なmiRNA定量が可能なカスタム設計のmiRNA PCRプライマーセットです。フォワードおよびリバースのPCRプライマーはいずれもmiRNA特異的であり、LNA技術により最適化されています。 各チューブは、200反応を処理するのに十分なアッセイが含まれています。

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比類のない検出感度

ステムループ型や標準のDNAプライマーを使用したこれまでmiRNAリアルタイムPCRシステムと比較して、LNAプライマーを使用すると、感度が大幅に向上します。特にATリッチなmiRNAの場合は顕著です（LNA-enhanced primers result in greatly increased sensitivity compared to DNA primers 参照）。

LCMサンプルや血清/血漿などの難しいサンプルから精製された全RNAを使用したmiRNA定量なども、本製品の検出感度があれば問題ありません（Detection of differential expression of miRNAs in LCM specimens from FFPE tissue sections および Differences in miRNA expression between serum samples 参照）。 

迅速、簡単そして再現性高く

使いやすい3時間プロトコールは、実験室での時間と労力を節約します。すべてのPCR反応にテンプレートとして同じcDNAを使用することにより、この手順は従来のmiRNA特異的cDNA合成を必要とするシステムと比較して大幅に簡素化されます。数回のピペット操作のために操作上の誤差も最小化することができます。結果として、日々の結果や、施設間での結果も再現性良く比較することができます。

miRCURY LNA miRNA PCR Assayは、miRCURY LNA RT KitおよびmiRCURY LNA SYBR Green PCR Kitの使用に最適化されています。他の試薬を使用すると、結果に影響することがあります。

デザインプロセス

miRCURY LNA miRNAカスタムPCRアッセイデザインツールを使用すると、既存のデザイン済製品以外のmiRNAに対して、高感度かつ特異的なLNAエンハンストPCRプライマーセットを簡単に設計することができます。高度なアルゴリズムは、60以上の異なる基準で約3,000のプライマーペアデザインを評価し、目的のmiRNAに最適なLNAプライマーセットをすぐさま設計します。このツールはmiRNA用に設計されていますが、長さが14–27ヌクレオチドの他の小型RNAでも使用できます。

デザインクライテリアには： 

1. 高い増幅効率と特異性のために、プライマーのLNA分布を変えてTm値を最適化
2. 効率的なPCR反応のために、セルフハイブリダイゼーションおよびクロスハイブリダイゼーションスコアの計算と調整
3. PCR反応における潜在的なプライマーダイマーの形成を回避
4. LNAオリゴヌクレオチド設計の広範な知識により、プライマーに有効なLNA塩基を配置
5. 高い配列類似性を有するmiRNAをmiRBaseにて検索・同定・排除

miRNAプロファイリングのための独自のシステム

miRCURY LNA miRNA PCR Assaysは、単一条件による逆転写反応とLNA PCR増幅を組み合わせることで、miRNAリアルタイムPCR市場における高い水準の性能と使いやすさを両立しました（Schematic outline of the miRCURY LNA miRNA PCR System 参照）。単一条件による逆転写反応により、複数のmiRNAリアルタイムPCRアッセイのテンプレートを一度のcDNA合成反応でまかなえます。これは貴重なサンプルを節約し、技術的なバリエーションを削減し、実験室での時間を節約します。さらに、フォワードおよびリバースプライマーはmiRNAに特異的であり、LNA技術で最適化されています。これは、1）優れた感度と非常に低いバックグラウンドを提供し、非常に低いmiRNAレベルの正確な定量化、および　2）非常に近似したmiRNA配列同士の識別を可能にする特異的アッセイを提供することを意味します。

カバレッジ

miRBase 20のすべての生物を対象とした20,000を超えるアッセイが利用可能です。1,400以上のアッセイは、合成生物サンプルや生物サンプルで感度、特異性、効率、バックグラウンドの検証がされています。その他のアッセイは、高品質、種特異的そして各生物種で最適な感度と特異性を示すような包括的なアルゴリズムにより、 in silico での検証がなされています。これは、同じターゲットでも、生物種ごとにいくつかの異なるアッセイ配列があることを意味します。最終的に、各生物種のアッセイは、生物の遺伝的背景に基づいて選択されます。NGS実験などから新規miRNAで作業している場合は、任意のLNA miRNAプライマーセットをカスタム設計することもできます。

miRCURY LNA miRNA PCR AssaysはmiRCURY LNA miRNA PCR Systemの一部として使用されます：

1. 成熟miRNAの定量
2. snoRNAの検出