Certal Residual DNA Detection Kits

내부 대조물질을 포함한 잔류 CHO 숙주 세포 DNA의 고감도 프로브 기반 검출에 사용

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Certal CHO Detection Kit (100)

Cat. No. / ID: 211822

100 x 25µL 반응용: 1.25mL Certal Residual DNA PCR 마스터 믹스, Certal 내부 대조물질 DNA 및 분석, CHO DNA 양성 대조물질 및 CHO 분석, 100µL 우라실-N-글라이코실레이스, 210µL High-ROX 염료 용액, 210µL ROX 염료 용액, 핵산 희석 완충액, TE 완충액

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Certal Residual DNA Detection Kits는 의약품 테스트의 분자생물학 응용 분야를 위한 제품입니다. 이 제품들은 질병의 진단, 예방 또는 치료 목적으로 사용할 수 없습니다.상표 보기.

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특징

정량화 한계가 낮고 재현성이 뛰어남
높은 선형 범위
신뢰할 수 있고 정확한 내부 대조물질
광범위한 real-time 사이클러를 위한 최적화된 프로토콜
내부 대조물질 및 양성 대조물질을 포함한 완전한 키트

제품 세부 정보

바이오 의약품 관련 작업을 할 때는 최종 치료 물질을 평가하여 숙주 세포의 잔류 DNA와 같은 오염 물질이 없는지 확인하는 것이 필수적입니다. Certal Residual DNA Detection Kits는 이중 라벨링된 가수분해(TaqMan®이라고도 함) 프로브를 사용하여 잔류 숙주 세포 유전체 DNA를 민감하고 신속하게 real-time PCR 정량화할 수 있도록 고안되었습니다. Certal CHO Detection Kit에는 CHO 잔류 숙주 세포 DNA의 듀플렉스 real-time PCR 검출을 위한 시약과 Certal 내부 대조물질 시약이 포함되어 있습니다. 또한 이 키트에는 CHO 숙주 세포 DNA로부터 신호가 없을 때 PCR 분석의 기능성을 검증하는 Certal Residual DNA 양성 대조물질 및 농도가 다른 2가지 형식의 ROX 패시브 기준 염료가 포함되어 있어 사실상 모든 real-time 기기에서 사용할 수 있습니다.

성능

Certal Residual DNA Detection Kits를 사용하면 잔류 유전체 DNA(gDNA)를 민감하고 안정적으로 검출하고 정량화할 수 있으며, 이는 안전하고 신뢰할 수 있는 바이오 의약품 생산에 필수적인 사항입니다(그림 ' 고감도 및 신뢰성 높은 검출' 참고). Certal CHO Detection Kit는 중국 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary, CHO) 세포에서 낮은 검출 한계와 높은 선형 범위로 잔류 gDNA를 검출하여 저농도의 잔류 gDNA도 확실하게 검출합니다(그림 ' 낮은 검출 한계' 참고). Certal Residual DNA Detection Kits는 광범위한 사이클러와 호환되며 민감하고 신뢰할 수 있는 데이터를 제공합니다(그림 ' 광범위한 사이클러에서 민감하고 신뢰할 수 있는 검출' 및 ' Rotor-Gene Q에서 CHO 유전체 DNA의 민감하고 신뢰할 수 있는 검출' 참고).

프로세스 안전성을 높이기 위해, Certal Residual DNA Detection Kits에는 음성 결과를 정확하게 해석하고 표적 분석을 간섭하지 않도록 특별히 설계된 QIAGEN 내부 대조물질이 포함되어 있습니다. QIAGEN 내부 대조물질은 유전체 DNA와 함께 증폭하면 안정적으로 검출됩니다(그림 ' QIAGEN 내부 대조물질의 안정적 검출' 참고).

그림 참조

고감도 및 신뢰성 높은 검출.

낮은 검출 한계.

광범위한 사이클러에서 민감하고 신뢰할 수 있는 검출.

Rotor-Gene Q에서 CHO 유전체 DNA의 민감하고 신뢰할 수 있는 검출.

QIAGEN 내부 대조물질의 안정적 검출.

원리

바이오 의약품 생산에 사용되는 숙주 세포주의 오염 물질이 최종 치료 물질에 없는지 확인하기 위해 Certal Residual DNA Detection Kits는 CHO 숙주 세포 DNA를 특이적으로 검출하는 사전 설계된 분석법을 제공합니다. 각 Certal Residual DNA Assay는 잔류 CHO 유전체 DNA를 안정적으로 검출하기 위해 최적화된 프라이머 쌍과 FAM 라벨링된 가수분해 프로브로 구성됩니다. 사람 배경 DNA와 Certal 내부 대조물질 DNA는 Certal Residual DNA Assay를 간섭하지 않습니다.

사전 혼합된 Certal 내부 대조군 분석에는 Certal 내부 대조군 DNA 검출을 위한 정방향 및 역방향 프라이머와 MAX 라벨링된 가수분해 프로브가 포함되어 있습니다. 이는 Certal Residual DNA Assay를 간섭하지 않도록 특별히 최적화되었습니다. Certal Residual DNA 양성 대조물질은 증폭 반응 자체의 기능성을 테스트하여 음성 결과를 정확하게 해석할 수 있게 해줍니다.

Certal ResDNA PCR 완충액은 민감하고 신뢰할 수 있는 정량적, 듀플렉스 real-time PCR 결과를 제공하도록 최적화되었습니다. 마스터 믹스에는 dUTP도 함유되어 있어 PCR을 시작하기 전에 우라실-N-글라이코실레이스(Uracil-N-Glycosylase, UNG)로 전처리할 수 있으므로 오염된 PCR 생성물이 후속 PCR 반응에 영향을 주지 않도록 보장합니다.

Certal Residual DNA Detection Kit 구성품
Certal Residual DNA Assays 및 대조물질 DNA
구성품	특징	이점
50x Certal Residual DNA Assay	사전 설계, 최적화, 검증된 프라이머-프로브 세트(FAM 라벨링됨)	잔류 CHO 숙주세포 DNA의 안정적인 검출
Certal Residual DNA 양성 대조물질	Certal Residual DNA Assay에 의해 증폭될 양성 대조군 DNA	샘플에서 잔류 숙주 세포 DNA가 검출되지 않는 경우 Certal Residual DNA Assay가 올바르게 수행되고 있는지 검증함
50x Certal 내부 대조군 분석	Certal 내부 대조물질 DNA 검출을 위해 사전 설계, 최적화, 검증된 프라이머-프로브 세트(MAX 라벨링됨)	Certal 내부 대조물질 DNA의 특이적 검출만 가능. Certal Residual DNA Assay를 간섭하지 않도록 특별히 최적화됨
Certal 내부 대조물질 DNA	Certal 내부 대조군 분석에 의해 증폭되는 내부 대조군 DNA	PCR 억제제의 존재를 배제하거나, 정제 단계에서 추가하여 정제 및 증폭을 조절하기 위해 사용할 수 있음
Certal ResDNA PCR 마스터 믹스
HotStarTaq DNA Polymerase	95°C에서 15분 활성화	실온에서 qPCR 반응 셋업
Certal ResDNA PCR 완충액	KCl 및 (NH₄)₂SO₄ 이온의 균형 잡힌 조성	특이적 프라이머 어닐링으로 신뢰할 수 있는 PCR 결과 보장
Certal ResDNA PCR 완충액	합성 인자 MP	같은 튜브에서 최대 4개의 유전자를 안정적으로 멀티플렉싱 분석
dNTP 혼합물	dTTP를 부분적으로 대체하고 선택적 UNG 처리를 가능하게 하는 dUTP 포함	우라실-N-글라이코실레이스(Uracil-N-Glycosylase, UNG)로 반응을 전처리할 때 PCR 생성물의 캐리오버를 효과적으로 제거
추가 구성품
50x ROX 염료 용액	Applied Biosystems 7500 real-time PCR 시스템에서 형광 신호의 정규화를 위한 별도의 패시브 기준 염료 튜브. 선택 사항: Agilent의 Stratagene 기기에서 사용 가능	ROX 염료가 필요한 사이클러에서 정확한 정량화. 모든 real-time 사이클러에서 PCR을 간섭하지 않음
50x High-ROX 염료 용액	Applied Biosystems 7900 및 StepOne real-time PCR 시스템에서 형광 신호의 정규화를 위한 별도의 패시브 기준 염료 튜브
우라실-N-글라이코실레이스(Uracil-N-Glycosylase, UNG)	핵산분해효소가 없는 순수한 재조합 효소의 별도 튜브	PCR 생성물의 캐리오버를 효과적으로 제거
QuantiTect 핵산 희석 완충액	핵산 표준물질의 희석 및 보관을 위한 독점적 배합의 완충액	희석 및 반응 셋업 중에 RNA 및 DNA 표준물질을 안정화시키고 튜브나 피펫 팁과 같은 플라스틱 표면에서 핵산의 손실을 방지

Certal Residual DNA Detection Kit에는 동결건조 분석 항목의 재용해 조제를 위한 완충액 TE와 RNase 불포함수도 포함되어 있습니다.

절차

Certal Residual DNA Detection Kits는 숙주 세포 DNA, Certal 내부 대조물질, Certal Residual DNA 양성 대조물질의 검출을 위한 간단한 절차를 제공합니다(그림 Certal Residual DNA Detection Kit 절차 참고). 제공된 마스터 믹스를 Certal Residual DNA Assay, Certal 내부 대조군 분석, Certal 내부 대조군 DNA와 혼합한 다음 샘플 DNA 또는 Certal Residual DNA 양성 대조물질을 추가하기만 하면 됩니다. 키트 안내서에는 다양한 사이클러에서 사용할 수 있도록 최적화된 프로토콜이 포함되어 있습니다. ROX는 농도가 다른 2개의 튜브로 제공되므로 모든 real-time 기기에서 사용할 수 있습니다(표 '올바른 ROX 농도 선택하기' 참고).

올바른 ROX 농도 선택하기
	불필요	ROX 염료 용액	High-ROX 염료 용액
기기	ROX 염료 용액
Rotor-Gene Q	X
Rotor-Gene 6000 및 Rotor-Gene 3000	X
Applied Biosystems 7500, ABI ViiA7		X
Applied Biosystems 7900HT, StepOne 및 StepOne Plus, ABI PRISM 7700, 7000, 7300			X
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000	X	선택 사항
iCycler iQ System	X
LightCycler 480	X

그림 참조

Certal Residual DNA Detection Kit 절차.

응용 분야

Certal Residual DNA Detection Kits는 내부 대조물질을 포함한 숙주 세포 DNA 검출을 위해 서열 특이적 프로브를 사용하여 민감한 real-time PCR이 가능합니다. 이 키트는 QIAGEN, Applied Biosystems, Bio-Rad, Roche, Agilent의 사이클러를 포함한 다양한 real-time 사이클러에서 사용할 수 있습니다.

지원되는 데이터 및 수치

QIAGEN 내부 대조물질의 안정적 검출.

표적(CHO) 분석 및 내부 대조군 분석을 위한 프라이머와 프로브를 Certal ResDNA 마스터 믹스에 추가합니다. 내부 대조물질 템플릿과 샘플 템플릿을 추가하고 반응을 분배하면 다양한 사이클러를 사용하여 실행할 수 있습니다. 선택 사항으로 양성 CHO 대조물질을 테스트할 수 있으며, UNG를 사용하여 PCR 제품의 캐리오버 오염을 제어할 수 있습니다.

리소스

For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes

FAQ

For quantification, it is recommended that a gDNA standard from your production cell be prepared using, for example, the QIAamp DNA Mini Kit. The positive control provided with Certal Residual DNA Detection Kits is not suitable for use as a qPCR standard for relative quantification.

FAQ ID -2979

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits can be freeze-thawed up to 6 times without a decrease in performance. However, great care should be taken to avoid inadvertently introducing RNases or DNases into the Internal Control template solutions. In general, in order to avoid repeated freeze-thaw cycles, we recommend preparing aliquots of the Internal Control template.

Note: The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits cannot be ordered separately

FAQ ID -2975

Certal Residual Detection Kits can be used on virtually any real-time cycler. The master mix supplied with the Kits does not contain ROX. Instead, 2 different ROX concentrations are supplied in separate tubes. “High-ROX Dye Solution” is for use with all Applied Biosystems cyclers except the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems and the ViiA7 System, and “ROX Dye Solution” is for use with the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems, the ViiA7 System, and, optionally, instruments from Agilent. Recommendations are provided in the handbook (page 11).

FAQ ID -2973

The probe is labeled with the MAX-NHS ester (MAX) reporter dye, which has a spectrum equivalent to HEX, JOE, or VIC dyes. IowaBlack is used as the quencher dye. IowaBlack is a non-fluorescent quencher (dark quencher).

FAQ ID -2976

No, calibration is required if the instrument is already calibrated for VIC (which is normally the case). Simply create a new detector, for example, “MAX/IowaBlack”, and assign VIC as the reporter dye and “none” as the quencher (Table 3, page 17 of the Certal Residual DNA Detection Kit handbook describes the procedure in the footnote).

MAX spectrum is nearly identical to VIC and the requirement for calibration has been thoroughly tested. There is no risk of crosstalk from the VIC channel to the FAM channel. However, crosstalk may occur from the FAM channel to the VIC channel if the pathogen target is present in very high copy numbers. Although this may slightly change the signal for the Internal Control, if a positive signal is detected in the FAM channel, then the Internal Control signal is no longer required.

FAQ ID -2977

Certal Residual DNA Detection Kits have been validated on the Rotor-Gene Q and the Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time System.

FAQ ID -2978

Usually the amount of gDNA in process samples is low, for example, in the ng range or even lower. Therefore, no crosstalk is expected.

FAQ ID -2980

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits is a non-linearized plasmid (naked nucleic acid).

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits has an artificial sequence that is not present in biological sample material.

FAQ ID -2974