QuantiTect Virus Kits

바이러스 RNA 및/또는 DNA의 고감도 검출용

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✓ 풍부한 지식과 전문성을 갖춘 제품 및 기술 지원

✓ 신속하고 안정적인 (재)주문

QuantiTect Virus Kit (1000)

Cat. No. / ID: 211015

1000 x 50µL 반응용: QuantiTect Virus 마스터 믹스(ROX 염료 포함), QuantiTect Virus RT 혼합물, RNase 불포함수, QuantiTect 핵산 희석 완충액

SEK 54,015.00

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Reference dye

Rox in Mastermix

Rox in vial

Reactions

1000

200

수량

QuantiTect Virus Kits은/는 분자생물학 분야에 사용하기 위한 것입니다. 이 제품들은 질병의 진단, 예방, 또는 치료 목적으로 사용할 수 없습니다.

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특징

싱글 및 멀티플렉스 분석에서의 높은 민감도
동일한 반응에서 바이러스 RNA 및/또는 DNA 검출
약한 양성 신호의 명확한 검출
신속한 범용 투스텝 프로토콜
더 많은 샘플 투입이 가능한 더 뛰어난 민감도의 5x 마스터 믹스

제품 세부 정보

QuantiTect Virus Kit는 서열 특이적 프로브를 사용한 멀티플렉스 real-time 원스텝 RT-PCR로 최대 4개의 바이러스 핵산 표적을 고감도로 검출할 수 있도록 특별히 고안되었습니다. 민감도 저하 없이 단일 튜브에서 여러 바이러스 RNA 및/또는 DNA 표적과 내부 대조물질을 검출할 수 있습니다. 농축된 5x 마스터 믹스가 더 많은 샘플 투입을 가능하게 하며 HotStarTaq Plus DNA Polymerase를 함유하고 있습니다. QuantiTect Virus RT 혼합물에는 바이러스 RNA의 고감도 검출에 최적화된 Sensiscript 역전사 효소의 독자적인 배합이 포함되어 있습니다. 두 가지 키트 형식이 있습니다. 형광 정규화를 위해 ROX 염료를 필요로 하는 사이클러를 위한 QuantiTect Virus Kit와 기타 다른 사이클러를 위한 QuantiTect Virus +ROX Vial Kit가 그것입니다. 편의를 위해 마스터 믹스는 2~8°C에서 보관할 수 있습니다.

성능

QuantiTect Virus Kits를 사용한 증폭은 높은 C_T 값의 적은 템플릿 양으로도 다양한 희석 범위에 걸쳐 가파른 시그모이드 곡선을 제공합니다(그림 ' 넓은 동적 범위에서 명확한 C_T 값 결정' 참고). 이로써 real-time PCR에서 바이러스 핵산의 정량화를 위한 정확한 C_T 값을 결정할 수 있습니다.

멀티플렉스 분석은 민감도 손실 없이 넓은 선형 범위에서 여러 바이러스 RNA 및/또는 DNA 표적과 내부 대조물질을 검출할 수 있습니다(그림 ' 넓은 선형 범위에서 바이러스 RNA의 안정적인 검출' 및 ' 향상된 소량의 바이러스 RNA 검출 능력' 참고).

키트와 함께 제공되는 QuantiTect 핵산 희석 완충액은 희석 및 반응 셋업 중에 RNA 및 DNA 표준물질을 안정화시키고 튜브나 피펫 팁과 같은 플라스틱 표면에서 핵산의 손실을 방지합니다. 이 완충액은 바이러스 핵산을 정량화하는 데 사용되는 표준물질을 안정적으로 희석하여 낮은 C_T 값에서 높은 C_T 값까지 넓은 선형 범위를 제공하고, 표준물질을 품질 저하 없이 오래 보관할 수 있도록 해줍니다(그림 ' RNA 표준물질의 안정적인 희석 및 보관' 참고).

그림 참조

넓은 동적 범위에서 명확한 C_T 값 결정.

넓은 선형 범위에서 바이러스 RNA의 안정적인 검출.

향상된 소량 바이러스 RNA 검출 능력.

RNA 표준물질의 안정적인 희석 및 보관.

원리

QuantiTect Virus Kits는 한 번의 시도로 싱글 또는 멀티플렉스 분석에서 고감도 바이러스 핵산 검출을 제공합니다(순서도 ' QIAGEN 멀티플렉스 키트' 참고). 최적화된 마스터 믹스는 멀티플렉스 반응의 PCR 생성물이 대응하는 단일 증폭 반응의 PCR 산물과 동일한 효율과 민감도로 증폭되도록 보장합니다.

대조물질과 표적 유전자를 별도의 반응이 아닌 동일한 반응에서 증폭하면 취급 오류를 최소화하여 유전자 정량화의 신뢰성을 높일 수 있습니다. QuantiTect Virus 완충액에는 K⁺ 및 NH₄⁺ 이온의 균형 잡힌 조성과 독자적인 합성 인자 MP 안정제가 함유되어 있어 프라이머와 프로브를 핵산 템플릿에 안정적이고 효율적으로 어닐링하여 높은 PCR 효율을 가능하게 합니다(그림 독자적인 PCR 완충액 참고). 또한 Sensiscript 역전사 효소의 독자적인 배합으로 바이러스 RNA의 고감도 역전사를 보장하며, HotStarTaq Plus DNA Polymerase는 엄격한 hot start를 제공하여 비특이적 생성물의 형성을 방지합니다.

QuantiTect Virus Kit의 구성품
	키트 구성품	특징	이점
5x QuantiTect Virus 마스터 믹스	농축 마스터 믹스	고감도 바이러스 검출에 최적화된 고농축 제품	민감도 향상을 위해 더 많은 양의 템플릿을 분석에 추가할 수 있음
	HotStarTaq Plus DNA Polymerase	95ºC 5분 활성화	실온에서 qPCR 반응 셋업
	QuantiTect Virus 완충액	NH₄⁺와 K⁺ 이온의 균형 잡힌 조성	특이적 프라이머 어닐링으로 신뢰할 수 있는 PCR 결과 보장
	QuantiTect Virus 완충액	합성 인자 MP	같은 튜브에서 최대 4개의 유전자를 안정적으로 멀티플렉싱 분석
추가 키트 구성품	QuantiTect Virus RT 혼합물	Sensiscript 역전사 효소의 독자적인 배합 함유	바이러스 RNA의 고감도 검출에 최적화됨
추가 키트 구성품	QuantiTect 핵산 희석 완충액	핵산 표준물질의 희석 및 보관을 위한 독점적 배합의 완충액	희석 및 반응 셋업 중에 RNA 및 DNA 표준물질을 안정화시키고 튜브나 피펫 팁과 같은 플라스틱 표면에서 핵산의 손실을 방지

그림 참조

QIAGEN 멀티플렉스 키트.

독자적인 PCR 완충액.

절차

QuantiTect Virus Kits는 서열 특이적 프로브를 사용하여 바이러스 핵산(RNA 및/또는 DNA)의 고감도 real-time PCR 분석 및 내부 대조물질을 제공합니다. 역전사 단계의 유무와 관계없이 반응을 수행할 수 있으므로 RNA 표적, DNA 표적 또는 RNA와 DNA 표적을 모두 검출하기 위한 멀티플렉스 분석을 유연하게 설계할 수 있습니다. 빠르고 안정적인 결과를 얻으려면 안내서의 프로토콜을 따르십시오.

마스터 믹스 내 ROX 패시브 기준 염료의 유무와 관계없이 키트를 사용할 수 있습니다(표 참고).

올바른 QuantiTect Virus Kit 선택하기
ROX 염료	키트	호환되는 사이클러
마스터 믹스 내에 제공됨	QuantiTect Virus Kit	Applied Biosystems 7500을 제외한 Applied Biosystems의 모든 사이클러
별도의 튜브로 제공	QuantiTect Virus +ROX Vial Kit	Applied Biosystems 7500 및 Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Agilent 및 기타 공급업체의 사이클러

바이러스 검출을 포함한 신속하고 높은 민감도의 end-point 원스텝 RT-PCR 응용 분야에서는 QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 사용을 권장합니다.

응용 분야

QuantiTect Virus Kits는 바이러스 DNA 및/또는 RNA 검출을 위한 서열 특이적 프로브와 내부 대조물질을 사용하여 고감도 real-time 싱글 또는 멀티플렉스 PCR 또는 원스텝 RT-PCR을 제공합니다. 이 키트는 Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche(캐필러리 사이클러 제외), Agilent의 기기를 포함한 다양한 real-time 서모사이클러에서 사용할 수 있습니다.

지원되는 데이터 및 수치

넓은 동적 범위에서 명확한 C_T 값 결정.

지시된 대로 소 바이러스성 설사 바이러스(Bovine Viral Diarrhea Virus, BVDV) RNA의 순차적 희석액을 QuantiTect Virus Kit를 사용하여 증폭 및 분석했습니다. 가파른 시그모이드 곡선 덕분에 적은 템플릿 양(10카피/μL)으로도 정확한 C_T 값을 측정할 수 있습니다. [A] BVDV1 RNA 검출. [B] BVDV2 RNA 검출. NTC: 템플릿 대조군 없음.

Specifications

Features	Specifications
Applications	바이러스 검출
SYBR Green I or sequence-specific probes	서열 특이적 프로브
Real-time or endpoint	Real-Time
Reaction type	역전사 및 PCR
Thermal cycler	대부분의 real-time 사이클러( LightCycler® 1.x 및 2.0과 같은 capillary 사이클러 제외)
Sample/target type	RNA 및/또는 DNA 표적
With or without ROX	마스터 믹스에 ROX가 포함되거나 ROX가 별도 바이알로 제공
Single or multiplex	싱글 또는 멀티플렉스

리소스

Now with even more applications!

For highly sensitive real-time singleplex or multiplex PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of viral DNA and RNA and internal controls

FAQ

Ensure PCR amplicons are as short as possible, ideally 60–150 bp. Always use the same algorithm or software to design the primers and probes. For optimal results, only combine assays that have been designed using the same parameters.

Check the functionality of each set of primers and probes in individual assays before combining the different sets in the multiplex assay. Choose compatible reporters and quenchers based on a specific instrument. See How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR.

FAQ ID -9093

No. UNG treatment does not provide any advantage for the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits because the mastermixes do not contain dUTP. Use the QuantiTect kits if you intend to use the UNG treatment.

FAQ ID -9092

If the extra peaks seem irregular or noisy, do not occur in all samples, and occur at temperatures less than 70 ºC, then these peaks may not represent real PCR products and instead may represent artifacts caused by instrument settings.

Usually extra peaks caused by secondary products are smooth and regular, occur reproducibly in most samples, and occur at temperatures greater than 70 ºC. Characterization of the product by agarose gel electrophoresis is the best way to distinguish between these cases. If only one band appears by agarose gel then the extra peaks in the dissociation curve are instrument artifacts and not real products. If this is the case, refer to the thermal cycler user manual, and confirm that all instrument settings (smooth factor, etc.) are set to their optimal values.

FAQ ID -90990

The REST 2009 (Relative Expression Software Tool) software applies mathematic models that compensate for the different PCR efficiencies of the gene of interest and reference genes. In addition, the software can use multiple reference gene normalization to improve the reliability of result, as well as provides statistical information suitable for robust comparison of expression in groups of treated and untreated. QIAGEN offers the REST 2009 software free of charge.

FAQ ID -9095

The Ct or threshold cycle value is the cycle number at which the fluorescence generated within a reaction crosses the fluorescence threshold, a fluorescent signal significantly above the background fluorescence. At the threshold cycle, a detectable amount of amplicon product has been generated during the early exponential phase of the reaction. The threshold cycle is inversely proportional to the original relative expression level of the gene of interest.

FAQ ID -2682

Check the template quality and integrity by amplifying an endogenous control gene. Check the amplicon by QIAxcel Advanced system or agarose gel electrophoresis to show that amplification was successful.

Determine whether the gene of interest is expressed in your sample. See How can I find out if my gene of interest is express in a specific tissue type or cell line. Ensure the assay setup and cycling conditions are correct, and that the data collection channel matches the emission wavelength of the fluorescent dye used. Use a control sample in which the gene of interest is definitely expressed.

If the issue persists, please send the original run file to QIAGEN Technical Services.

FAQ ID -9091

For duplex analysis, using non-fluorescent quenchers (e.g., Black Hole Quencher^®) is preferred over fluorescent quenchers (e.g., TAMRA fluorescent dye). For triplex and 4-plex analysis, QIAGEN strongly recommends using non-fluorescent quenchers. Generally, use the green channel, the yellow channel, and the orange and crimson channels to detect the least abundant target, the second least abundant target, and the two most abundant targets, respectively. For instrument-specific recommendations, please see the handbooks for the QuantiTect Multiplex PCR kit, QuantiFast Multiplex kit or Rotor-Gene Multiplex kit.

FAQ ID -9094

The gDNA wipeout buffer incubation step can be skipped when the total RNA is free from genomic DNA. However, the gDNA wipeout buffer is still required to be added because the reverse transcription step is optimized in the presence of components in the gDNA wipeout buffer.

FAQ ID -9098

Store the standards at a high concentration in aliquots at -20^oC to -70^oC. If using low concentrations, stabilize standards with carrier nucleic acid. It is always best to use freshly diluted standards for each experiment. If possible, use siliconized tubes for standard (and target) dilutions. This will prevent any unspecific binding of nucleic acids to the plastic.

FAQ ID -9099

Reliable HRM analysis results depend on template quality, highly specific HRM PCR kit with a saturation dye, a real-time instrument with HRM capability, and powerful software package. Factors critical for successful HRM analysis are:

Use the same genomic DNA purification procedure for all samples being analyzed by HRM. This avoids variation due to differing composition of elution buffers.
DNA template concentrations should be normalized using the same dilution buffer. Ensure the C_T values are below 30 and differ no more than 3 C_T values across individual samples.
Design assays with amplicon length 70–350 bp. For SNP analysis, use amplicon length 70–150 bp.
Always start with 0.7 µM primer concentration

For more details, please refer to the HRM Technology – FAQs and the Critical Success Factor for HRM performance.

FAQ ID -9097

Shorter amplification products facilitate high PCR efficiencies. Ideally, amplicon length should be less than 150 bp for optimal amplification efficiency. PCR efficiencies close to 100% are a crucial prerequisite for accurate quantification of target copy numbers in real-time PCR.

FAQ ID-751

The QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits are based on similar reaction chemistry and show identical sensitivity but as a new feature, the QuantiFast Pathogen kits include an Internal Control template and the corresponding primer/probe set for duplex amplification of a user-defined pathogen target with the provided Internal Control. Additional new features are pack size, kit variants, ROX variants, and speed.

FAQ ID -2448

Yes, the Internal Control RNA (High conc.) and Internal Control DNA (High conc.) templates are available under a separate catalog number. After reconstitution according to the description in the handbook, these IC templates have a 10x higher concentration than the Internal Control templates provided in the kits. They are sufficiently concentrated to be spiked into the sample prep without replacing too much of the sample input volume.

**Please note that there is no assay (primer/probe set) for amplification of the IC included in these separate catalog numbers. The assay is only included in the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit and QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit. The ICs cannot be used with the QuantiTect Virus kits because the assay (primer/probe set) for the detection of the IC is provided with the QuantiFast Pathogen Kits only.

FAQ ID -2451

Depending on primer design and copy number of target, primer-dimer may occur and its signal might be detected. Typical strategies against this are to optimize PCR conditions and/or redesign the assay.

Alternatively, an additional data-acquisition step can be added to the 3-step cycling protocol. First, determine the melting temperatures (T_m) for both the amplicon and the primer-dimer. Then, add a 15 second data-acquisition step with a temperature that is higher than the primer-dimer T_m, but approximately 3ºC lower than the specific amplicon T_m.

FAQ ID -9096