IDH1/2 RGQ PCR Kit

用于检测FFPE脑部肿瘤组织DNA中12种IDH1和IDH2突变

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IDH1/2 RGQ PCR Kit (20)

Cat. No. / ID: 873001

For 20 reactions: 9 Primer and Probe Mixes, WT Control, Positive Control, Master Mix, Nuclease-Free Water

SGD 8,794.00

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数量

仅作研究用途。不用于诊断程序。任何表述或表示都并非旨在提供诊断、预防或治疗疾病的信息。

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特点

利用PCR发夹技术准确检测7种IDH1和5种IDH2突变
利用ARMS PCR技术灵敏地鉴别3种突变
可用于即用型解决方案的标准化分析
可用于Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪的简单的工作流程

产品详情

在Rotor-Gene Q 5plex HRM Instrument上采用IDH1/2 RGQ PCR Kit进行real-time PCR，可实现对12种IDH1和IDH2基因突变的检测。试剂盒提供了所有必需的试剂，可快速且灵敏地实现IDH1和IDH2突变的检测。突变检测引物和探针混合物将引物与探针相结合，同时扩增突变型和野生型目标序列，此为还有一个核苷酸，3'端添加了磷酸基团，以防止延伸（PCR发夹技术），它可以特异性地结合野生型目标序列。

原理

利用IDH1/2 RGQ PCR Kit中的试剂可完成9个独立的扩增反应，检测12种突变：

IDH1基因的132和100密码子及IDH2基因的172密码子的3次总扩增反应
IDH1基因的132和100密码子及IDH2基因的172密码子的3次突变扩增反应
IDH1 R132H、IDH1 R132C和IDH2 R172K突变的3次突变特异性扩增反应

使用IDH1/2 RGQ PCR Kit检测*IDH1*和*IDH2*突变
基因	突变	碱基变化	Cosmic ID
IDH1	Arg132His	395G>A	COSM28746
	Arg132Cys	394C>T	COSM28747
	Arg132Ser	394C>A	COSM28748
	Arg132Gly	394 C>G	COSM28749
	Arg132Leu	395G>T	COSM28750
	Arg132Val	394_395 CG>GT	COSM28751
	Arg100Gln	299G>A	COSM88208
IDH2	Arg172Lys	515G>A	COSM33733
	Arg172Met	515G>T	COSM33732
	Arg172Trp	514A>T	COSM34039
	Arg172Ser	516G>T	COSM34090
	Arg172Gly	514A>G	COSM33731

总反应混合物

Total Primers and Probe Mixes（PPM-Total）使用引物和探针扩增突变型和野生型目标序列。

突变检测反应混合物

突变检测引物和探针混合物将引物与探针相结合，同时扩增突变型和野生型目标序列，此为还有一个核苷酸，3'端添加了磷酸基团，以防止延伸（PCR发夹技术），它可以特异性地结合野生型目标序列。

当PCR模板包含野生型序列时，因具有更高的亲合力，3'-磷酸寡核苷酸相比PCR引物的结合更具优势。DNA聚合酶几乎无延伸，且几乎未观察到扩增。

当存在突变序列时，PCR引物结合相比3'-磷酸寡核苷酸结合更具优势，扩增将继续。

突变鉴定反应混合物

ARMS（Amplification Refractory Mutation System）利用DNA聚合酶鉴别PCR引物的3'端是否匹配，实现等位基因特异性的扩增。

当PCR引物完全匹配时，扩增效率最高。当3'碱基不匹配时，仅出现低水平的背景扩增。

程序

IDH1/2 RGQ PCR Kit提供了12种IDH1和IDH2基因突变检测所需的全部试剂。使用九种引物和探针混合物同时扩增突变型和野生型目标序列。只需将模板DNA及适当的引物和探针混合物加入即用型PCR预混液中，在Rotor-Gene Q 5plex HRM Instrument上采用试剂盒手册所述的优化循环程序开始反应。对于DNA纯化，我们推荐使用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，参照IDH1/2 RGQ PCR Kit手册中给定的改进实验方案。