PyroMark OneStep RT-PCR Kit

• 焦磷酸测序专用的终点法RT-PCR解决方案
• 在单管内实现高效逆转录后扩增
• 独特的酶混合液和缓冲液，确保高特异性和高灵敏度
• 高效的流程，无需优化

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为后续焦磷酸测序优化的试剂盒，可确保RNA模板的高效逆转录，以及cDNA高特异性、可靠扩增。整个过程在单管中进行，速度合理，便于使用，污染风险低。

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是第一款专为后续的焦磷酸测序设计并优化的RT-PCR试剂盒。该试剂盒可对RNA模板进行灵敏的一步式RT-PCR。RT-PCR的产物可用于多种焦磷酸测序的应用，如病毒检测和基因分型、特异性等位基因表达分析和对mRNA剪切异构体的检测。该试剂盒具有独特的酶组合和特别研制的反应缓冲液，确保可在一个试管中高效、高特异性的进行反转录和PCR，无需优化。该试剂盒中含有Q-Solution，确保了对具有复杂二级结构和高GC含量的模板的高效扩增。CoralLoad Concentrate确保RT-PCR产物在琼脂胶上方便上样和直观观察。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有专为逆转录和PCR扩增设计的酶混合液。

• QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix中含有Omniscript和Sensiscript Reverse Transcriptases，可高效、高特异性的进行逆转录。两个逆转录酶对RNA都有较高的亲和力，通过二级结构促进逆转录，同时抑制其他的逆转录酶。Omniscript Reverse Transcriptase专为大于50 ng的RNA逆转录设计，而Sensiscript Reverse Transcriptase适用于小于50 ng的RNA。独特的酶组合可对大小在1 pg至2 μg的起始RNA进行高效、灵敏的逆转录。
• HotStarTaq DNA Polymerase可进行高特异性的热启动PCR扩增。在逆转录过程中，经化学修饰的HotStarTaq DNA Polymerase没有活性，不会影响逆转录反应。在逆转录后，将反应缓冲液加热至95°C，15分钟，以活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。使用HotStarTaq DNA Polymerase进行热启动流程，可减少第一次PCR循环中非特异性退火引物和引物二聚体的延伸，确保PCR的高度特异性和可重复性。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为高效的逆转录和特异性扩增设计。缓冲液独特的组成可实现高温（50°C）下的逆转录。较高的反应温度可破坏二级结构，进而提高逆转录反应的效率，对有限量的RNA模板的一步式RT-PCR反应格外重要。QIAGEN的酶和一步式RT-PCR缓冲液配套使用，确保高效的PCR反应效率。该缓冲液确保引物特异性退火的温度范围和Mg²⁺浓度范围均比传统PCR缓冲液的范围大。因此，通常无需通过调节退火温度或Mg²⁺浓度来优化RT-PCR（参见" Increased specificity of primer annealing"）。

CoralLoad Concentrate

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有CoralLoad Concentrate。CoralLoad Concentrate含有胶上样试剂和两个凝胶示踪染料，一个橘色，一个红色（参见" CoralLoad Concentrate"）。在CoralLoad Concentrate存在的条件下扩增出的RT-PCR产物可直接上样至琼脂糖凝胶。

Q-Solution

PyroMark OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，这是一种新型添加物，可改变核酸的熔解行为。Q-Solution可促进具有复杂二级结构和高GC含量的模板的逆转录和扩增。

反转录和PCR可在同一管内完成。反应建立时要加入反应所需的所有组分，一旦反应开始后无需再加入其他组分。经优化的循环条件，包括30分钟的逆转录反应时间、HotStarTaq DNA Polymerase酶的活化，以及随后的模板扩增。

PyroMark OneStep RT-PCR Kit是专为焦磷酸测序优化的试剂盒，适合下列焦磷酸测序应用：

• 病毒检测
• 病毒基因分型
• 特异性等位基因表达分析
• mRNA剪接异构体的检测