Cómo escoger entre dPCR y qPCR – Descubra las ventajas y decida si la solución es adecuada para los objetivos de su proyecto de investigación
Al comparar las tecnologías de las dPCR y de las qPCR, la diferencia clave es el poder de decisión. Aunque algunas ofrecen una capacidad de cuantificación y detección de ácido nucleico fiable, la diferencia clave entre las dos tecnologías se puede comparar a las diferencias que existen entre una radio analógica y una digital, como afirma el Dr. Jim Huggett, Principal Scientist del National Measurement Laboratory. «En una radio analógica, el dial tiene que sintonizarse con mucha precisión para dar con el canal deseado sin interferencias. Aun así, la calidad depende de la recepción y la señal puede sufrir interferencias aunque esté estática. Este ejemplo correspondería a las qPCR. Es fiable, pero para conseguir un resultado óptimo, requiere una optimización y, aun así, hay que lidiar con el ruido de fondo. Con la radio digital, sin embargo, basta con buscar el canal. Si se localiza, sonará con una señal clara. Si no, la radio no lo detectará. Este último ejemplo correspondería a las dPCR, que proporcionan resultados precisos y binarios. Su funcionamiento se basa, literalmente, en hacer recuentos de la presencia o ausencia de las moléculas de ADN. La claridad de los resultados, en combinación con una bajísima tasa de error, lo convierte en una solución con un altísimo nivel de precisión. Las PCR digitales son perfectas para medir diferencias cuantitativas más pequeñas».
Diferencias y similitudes entre las qPCR y las dPCR
| Real-time PCR/qPCR | PCR digital |
|---|---|
| Cuantitativa, relativa o absoluta, pero requiere muestras de referencia o curvas estándar |
Cuantitativa y absoluta, no requiere estándares ni referencias |
|
PCR en bloque
|
División de muestras
|
| Mide la amplificación de PCR en cada ciclo | Mide al final de cada ciclo de PCR |
| Detecta índices de mutación de >1 % | Detecta índices de mutación de ≥0,001 % (relación señal-ruido elevada) |
| Protocolos bien establecidos | Mayor precisión para una reproducibilidad superior entre laboratorios |
¿Cuándo optar por las dPCR en lugar de por las qPCR?
A veces, los científicos que se dedican a la biología molecular y la investigación genómica que implica la cuantificación de ácidos nucleicos se enfrentan a decisiones difíciles. ¿Qué técnica de cuantificación debe utilizarse para alcanzar los objetivos de investigación de manera eficiente? ¿La PCR digital (dPCR) más fiable y precisa, o una real-time PCR cuantitativa (qPCR) más estandarizada y con la que el equipo está acostumbrado a trabajar? Ambas tecnologías tienen similitudes, ventajas y limitaciones, por lo que la elección de una u otra solución depende de la aplicación.
El cuadro de aplicaciones indica el nivel de idoneidad de cada tecnología para algunas de las aplicaciones más habituales.